二乙酰一肟安替比林光度法

㈠方法简介

二乙酰一肟 [CH₃C(=NOH)COCH₃]，别名：2,3-丁二酮一肟，联乙酰一肟，双乙酰一肟，甲基肟乙基甲酮，丁二酮单肟，2,3-丁二酮肟]与尿素及安替比林反应呈现黄色,在波长460 nm处有最大吸收峰, 校准曲线在0~14 μg范围内线性关系良好。该法是国家规定的标准检验方法。

在水浴显色反应过程中，加入少量的硫酸钾溶液与硫酸反应生成硫酸氢钾可以提高反应的温度(纯硫酸沸点330℃，添加硫酸钾后温度可达400℃)，加速其反应。加入30 g/LK₂SO₄溶液2.0 mL，保持水浴沸水剧烈沸腾35 min就能使显色更完全、更稳定。

㈡仪器

⑴ 分光光度计。

⑵ 棕色具塞比色管：25 mL。

⑶ 比色皿：1 cm。

⑷ 微量进样器：50 μL、100 μL。

⑸ 水浴锅。

㈢ 试剂

⑴ 二乙酰一肟溶液:2 g/L，称取0.2 g二乙酰一肟[CH₃C(=NOH)COCH₃，别名：2,3-丁二酮一肟，联乙酰一肟，双乙酰一肟，甲基肟乙基甲酮，丁二酮单肟，2,3-丁二酮肟],溶于10 % 乙酸中，并稀释至100 mL保存于棕色瓶中备用。

⑵ 安替比林溶液：2 g/L，称取0.2 g安替比林[ C₆H₅NN(CH₃)C(CH₃)CHCO，1, 5-二甲基-2-苯-3-吡唑酮,]溶于100 mL（1+1）硫酸中，保存于棕色瓶中。

⑶ 硫酸钾溶液：30 g/L，称取分析纯硫酸钾3.0 g加纯水稀释至100 mL。

⑷ 尿素标准使用溶液：4.0 μg/mL，准确称取0.1000 g尿素于小烧杯中，加少量纯水溶解后转入1000 mL容量瓶中，加0.1 mL三氯甲烷并用纯水定容，再从中吸取4.00 mL于100 mL容量瓶中，用纯水定容后待用。

㈣校准曲线的制作

⑴ 在25 mL棕色具塞比色管中，加入4.0 μg/mL的尿素标准使用液的体积(mL)分别为：0、0.50、1.00、2.00、3.00、3.50 加纯水至10 mL。

    ⑵ 向比色管中，各加入二乙酰一肟溶液1.0 mL。混匀后再加入安替比林溶液2.0 mL，混匀。放置3 min后，加入硫酸钾溶液2.0 mL，用纯水稀释至25 mL。

    ⑶ 将上述各管置于沸水浴锅中,沸水水面高度以能高于具塞比色管内液面高度为标准,保持沸水一直处于剧烈沸腾状态。以放入具塞比色管后沸水温度达到要求开始记时，煮沸35 min，取出具塞比色管，流水冲洗冷却2 min。用纯水将各比色管补充至刻度后摇匀。

    ⑷ 在460 nm处,以纯水为对照,用1 cm比色皿,测定各管吸光度值。

⑸ 以尿素的质量值[m_尿素/μg ]为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制校准曲线，如 图9-12。

㈤测定步骤 

⑴ 取三价铬镀液1 mL(V₁/mL)于500 mL容量瓶(V_α/mL)中，用水稀至刻度，摇匀。

⑵ 从500 mL容量瓶中吸取稀释后的镀液1 mL(V₂/mL)于50 mL容量瓶(V_b/mL)中，用水稀至刻度，摇匀。

⑶从50 mL容量瓶中吸取稀释后的镀液1 ~5 mL(V₃/mL,使m_尿素 ≯14 μg )两份 ，分置于两支25 mL棕色具塞比色管中。

⑷将两支比色管中的一支直接用水定容至刻度摇匀（用作参比溶液）。